判断阴性对照是否污染,关键看它是否“干净"——如果它长了菌或出现阳性信号,就说明实验环境或操作有问题了。具体可以这样排查:
一、先看结果
无菌检验:阴性对照应该无菌生长,一旦有菌落出现,立刻排查污染。
PCR检测:阴性对照不该有DNA谱带,有带就说明体系被污染了。
二、排查污染源
操作污染:
检查手套、吸头是否混用,操作时是否规范。
用稀酸擦拭台面,更换污染手套。
试剂污染:
试剂分装保存,避免反复冻融。
用无菌水做空白对照,若长菌说明试剂有问题。
环境问题:
实验台、通风系统是否定期消毒。
操作区和产物分析区是否严格隔离。
三、优化操作
分区操作:标本处理、扩增、产物分析区分开。
工具专用:移液器、吸头等不混用。
严格消毒:实验台、设备表面用含氯消毒液擦拭。
四、验证结果
阳性对照:用已知阳性样本验证检测能力。
阴性对照:用无菌水或空白基质做对照。
同步培养:和样品同温同时间培养,全程无菌落才算合格。