判断细胞培养基是否长菌(即被污染)主要可以通过肉眼观察和显微镜检查两种方式。以下是具体的判断方法:
肉眼观察
细菌污染:通常在污染后4-6小时,培养基会变得浑浊。有时稍加震荡,便会有很多混浊物漂起。细菌污染爆发非常快,上午染菌,下午或第二天就爆发,培养基会变浑浊,并且pH发生很大变化,培养基颜色会变化很大,一般是变黄。
真菌污染:真菌污染一般爆发时间在2-3天。在爆发时,培养基里会有肉眼可见的污染物,培养基也开始变浑浊。如果时霉菌污染,爆发时,培养基里肉眼可见一坨一坨的白点;如果是念珠菌,会在显微镜下看到一串一串的珠子样的。
显微镜下观察
细菌污染:在显微镜下呈黑色细沙状,或背景有大量黑点。受细菌污染的细胞形态可能会发生改变(如多角、多核等),胞质中产生空泡、细胞漂浮凋亡。
真菌污染:有些真菌呈类似棉花絮状的漂浮物。若是念珠菌会呈卵圆状,在细胞周边生长。早期并不会使得培养基变黄变浑浊,但在显微镜下可观察到菌丝体。真菌形成的菌丝呈丝状,管状,树枝状,串珠状。
其他判断方法
培养基不浑浊,有丝状物质:可以初步判断是真菌污染。
培养基不浑浊、没有丝状物质,但是细胞状态变差,生长变慢:在显微镜下观察可能会有小黑点,是细胞凋亡坏死,释放出大量碎片,看起来就像黑胶虫,细胞传代以后就出现细胞间黑点,细胞空泡化,很多类似凋亡、坏死的细胞,最终细胞漂浮,死亡。