大豆胰蛋白酶抑制因子酶联免疫分析试剂盒操作步骤

操作步骤
1.   标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。   大豆胰蛋白酶抑制因子 
200 ng/L   5 号标准品  150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液
100 ng/L   4 号标准品  150µl 的5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
50ng/L   3 号标准品  150µl 的4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
25ng/L   2 号标准品  150µl 的3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
12.5ng/L   1 号标准品  150µl 的2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
2.   加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 10 µl（样品zui终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.   温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。      
4.   配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5.   洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5 次，拍干。
6.   加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。  
7.   温育：操作同 3。
8.   洗涤：操作同 5。
9.   显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.  大豆胰蛋白酶抑制因子
10.  终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.  测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。  测定应在加终止
计算 
    以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。