常用培养基配方

01 糖发酵管
成分:
牛肉膏 5g
蛋白胨 10g
氯化钠 3g
磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O） 2g
0.2%滇麝香草酚蓝溶液 12mL
蒸馏水 1000mL
pH7.4
制法:
1葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按0.5%加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内,121℃高压灭菌15min.
2其他各种糖发酵管可按上述成分配好后,分装每瓶100mL,121℃高压灭菌15min.另将各种糖类分别配好10%溶液,同时高压灭菌.将5mL糖溶液加入于100mL培养基内,以无菌操作分装小试管. 
注:蔗糖不纯,加热后会自行水解者,应采用过滤法除菌.
试验方法:从琼脂斜面上挑取小量培养物接种,于36℃±1℃培养,一般观察2～3d.迟缓反应需观察14～30d.

02 ONPG培养基
成分:
邻硝基酚β-D-半乳糖昔（ONPG） 60mg
（O-Nitrophenyl-β-D-galactopyranoside）
0.01mol/L磷酸钠缓冲液（pH7.5） 10mL
1%蛋白胨水（PH7.5） 30mL
制法:将ONPG溶于缓冲液内,加入蛋白胨水,以过滤法除菌,分装于10mm×75mm试管,每管0.5mL,用橡皮塞塞紧.
试验方法:自琼脂斜面上挑取培养物1满环接种,于36±1℃培养1～3h和24h观察结果.如果β-半乳糖苷酶产生,则于1～3h变黄色,如无此酶则24h不变色.

03 西蒙氏柠檬酸盐培养基
成分:
氯化钠 5g 
硫酸镁（MgSO4·7H2O） 0.2g
磷酸二氢铵 1g
磷酸氢二钾 1g
柠檬酸钠 5g
琼脂 20g
蒸馏水 1000mL
0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40mL
pH6.8
制法:先将盐类溶解于水内,校正pH,再加琼脂,加热溶化.然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121℃高压灭菌15min.放成斜面.
试验方法:挑取少量琼脂培养物接种,于36±1℃培养4d,每天观察结果.阳性者斜面上有菌落生长,培养基从绿色转为蓝色. 

04 缓冲葡萄糖蛋白胨水（MR和VP试验用）
成分:
磷酸氢二钾 5g
多胨 7g
葡萄糖 5g
蒸馏水 1000mL
pH7.0
制法:溶化后校正pH,分装试管,每管1mL,121℃高压灭菌15min.
甲基红（MR）试验:自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中,于36±1℃培养2～5d,哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养.滴加甲基红试剂一滴,立即观察结果.鲜红色为阳性,黄色为阴性.甲基红试剂配法:10mg甲基红溶于30mL95%乙醇中,然后加入20mL蒸馏水.
V-P试验:用琼脂培养物接种本培养基中,于36±1℃培养2～4d.哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养.加入6%α-萘酚-乙醇溶液0.5mL和40%氢氧化钾溶液0.2mL,充分振摇试管,观察结果.阳性反应立刻或于数分钟内出现红色,如为阴性,应放在36±1℃下培养4h再进行观察.

05克氏柠檬酸盐培养基
成分:
柠檬酸钠 3g
葡萄糖 0.2g
酵母浸膏 0.5g
单盐酸半胱氨酸 0.1g
磷酸二氢钾 1g
氯化钠 5g
0.2%酚红溶液 6mL
琼脂 15g
蒸馏水 1000mL
制法:加热溶解,分装试管,121℃高压灭菌15min.放成斜面.
试验方法:用琼脂培养物接种整个斜面,在36±1℃培养7d,每天观察结果.阳性者培养基变为红色.

06 丙二酸钠培养基
成分:
酵母浸膏 1g
硫酸铵 2g
磷酸氢二钾 0.6g
磷酸二氢钾 0.4g
氯化钠 2g
丙二酸钠 3g
0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL
蒸馏水 1000mL
pH6.8
制法:先将酵母浸膏和盐类溶解于水,校正pH后再加入指示剂,分装试管,121℃高压灭菌15min. 
试验方法:用新鲜的琼脂培养物接种,于36±1℃培养48h,观察结果.阳性者由绿色变为蓝色.

07 葡葡糖铵培养基
成分:
氯化钠 5g
硫酸镁（MgSO4·7H2O） 0.2g
磷酸二氢铵 1g
磷酸氢二钾 1g
葡萄糖 2g
琼脂 20g
蒸馏水 1000mL
0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40mL
pH6.8
制法:先将盐类和糖溶解于水内,校正pH,再加琼脂,加热溶化,然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121℃高压灭菌15min,放成斜面.
试验方法:用接种针轻轻触及培养物的表面,在盐水管内做成极稀的悬液,肉眼观察不见混浊,以每一接种环内含菌数在20～100之间为宜.将接种环灭菌后挑取菌液接种,同时再以同法接种普通斜面一支作为对照.于36±1℃培养24h.阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长;阴性者不生长,但在对照培养基上生长良好.如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果.
注:容器使用前应用清洁液浸泡.再用清水,蒸馏水冲洗干净,并用新棉花做成棉塞,干热灭菌后使用.如果操作时不注意,有杂质污染时,易造成假阳性的结果.