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淋巴细胞分离液使用过程问题解答
更新时间:2021-07-26   点击次数:433次
  淋巴细胞分离液使用过程问题解答
  问题1.淋巴细胞分离液的温度对于分离的影响有多大,有无做过不同室温温度及不同液体温度下的分离效果验证?
  淋巴细胞分离液由于配制时的环境温度即为20℃±2℃,保证该温度下分离液密度为1.077±0.001g/mL,分离液的作用原理:密度梯度分离,分离成功的关键即为正确的密度保证。温度和密度紧密,高温度下,分离液低密度;低温度下,分离液高密度,因此建议使用时,样品和分离液的温度均应为18℃-22℃之间。
  建议: 使用时,环境、样品及分离液的温度控制均应在20℃±2℃
  问题2.如何更好的提高血液分离效率,那些因素会导致提取效率过低?
  影响因素:
  ü样本新鲜程度:*分离时间为2h以内
  ü血液稀释比例
  ü所使用离心管直径高度:分离液和样本量在管中的高度不得超过管体积的2/3
  ü分离液与样本的比例:分离液至少得和上样样本体积一致,分离液越多越好
  ü血液个体差异问题
  ü血液及分离液都不要经过冷藏及冷冻,且使用时的温度在18℃-22℃之间
  离心力及离心时间
  问题3.每个客户的离心机不同,是否可以使用统一的离心力提取细胞?如果使用统一的离心力提取淋巴细胞效果如何?
  因为血液个体差异粘稠度、采血时间、血液量等,根据不同的因素来进行调整。可以统一离心力,但需根据个体差异略有改动。
  问题4.有一些的离心机有升速降速速率调节,如何来设定升速降速速率以保证能得到数量及纯度较高的PBMC(举例)?有一些普通的离心机没有升降速速率调节,PBMC层就就形成得不好,如何解决此类问题?
  建议升速为1min,降速为3min分离效果理想。升降速时间不包含在离心时间里。
  问题5.说明书上是针对骨髓、脐带血、外周血标本,我们在使用过程中还会遇到胸腹水、心包积液等体液标本,那对这类标本的分离没有特殊分离要求?
  除血液样本以外,其他来源样本首先要富集样本中的细胞,要求细胞悬液浓度控制在2×108-1×109个/ml,效果*。
  问题6.有一些标本本身淋巴细胞百分比就比较低,如何尽可能的提高得率或是有无方法去除掉一些其他不要的细胞?
  要选择合适的试管、样本要2h以内进行分离,分离液使用量要多余样本量,以及离心力、离心时间、温度要合适等。
 

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