技术文章您现在的位置:首页 > 技术文章 > 产酸克雷伯菌PCR检测试剂盒反应五要素
产酸克雷伯菌PCR检测试剂盒反应五要素
更新时间:2021-03-18   点击次数:651次

产酸克雷伯菌PCR检测试剂盒反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。

毒蛇因子(CVF) elisa试剂盒
牛蛙生长激素(GH) elisa试剂盒
家蚕卵黄蛋白(LT) elisa试剂盒
蝶蛹金小蜂卵黄蛋白原(vtg)elisa试剂盒
植物磷脂酰甘油(PG)elisa试剂盒 
植物玉米索核苷(ZR )elisa试剂盒
植物赤霉素(GA) elisa试剂盒
植物血凝素(PHA )elisa试剂盒
植物生长激素(GH )elisa试剂盒 
植物凝脂酸(PA )elisa试剂盒 
植物吲哚乙酸(IAA) elisa试剂盒
麦胚凝集素/凝集蛋白(WGA)elisa试剂盒 
荆豆凝集素(UEA)elisa试剂盒 
槐凝集素(SJA)elisa试剂盒 
花生凝集素(PNA)elisa试剂盒 
大豆凝集素(SBA)elisa试剂盒 
菜豆凝集素(PHA)elisa试剂盒 
扁豆凝集素(LCA)elisa试剂盒 
蓖麻凝集素(RCA)elisa试剂盒 
豌豆凝集素(PSA)elisa试剂盒 
双花扁豆凝集素(DBA)elisa试剂盒 
植物钙调素(CAM)elisa试剂盒 
植物激素脱落酸(ABA )elisa试剂盒
植物维生素K1(VK1)elisa试剂盒 
植物维生素B12(VB12)elisa试剂盒 
植物维生素A(VA)elisa试剂盒 
植物维生素E(VE)elisa试剂盒 
植物维生素D2(VD2)elisa试剂盒 
植物维生素D3(VD3)elisa试剂盒 
 

化工仪器网

推荐收藏该企业网站