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ELISA 试剂盒测定外源性物质
发布时间:2019-08-05   点击次数:105次

外源性物质常常是由于用于 ELISA 试剂盒测定的血标本的采集、贮存等不当所致。如标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存过久、标本凝集不全和采血管中添加物等影响。

(1)标本溶血 由于各种人为原因引起的标本溶血,均可因红细胞破坏溶解时释放出大量具有过氧化物酶活性的血红蛋白,在以辣根过氧化物酶为标记的 ELISA 测定中,会导致非特异性显色,干扰测定结果。为克服上述干扰作用,标本采集时必须注意避免溶血。

(2)标本受细菌污染 因菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶,因此,被细菌污染的标本同溶血标本一样,亦可产生非特异性显色而干扰测定结果。

(3)标本保存不当 在冰箱中保存过久的标本,血清中 IgG 可聚合成多聚体、AFP 可形成二聚体,在间接法 ELISA 测定中会导致本底过深、甚至造成假阳性;标本放置时间过长(如一天以上),有时抗原或抗体免疫活性减弱,亦可出现假阴性。为克服上述干扰,ELISA 测定的血清标本宜为新鲜采集;如不能立即测定,5 天内测定的血 清标本可存放于 4℃,1 周后测定的血清标本应低温冻存;冻存后融解的标本,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混合后再测定,但混匀时应轻柔,不可强烈振 荡。

(4)标本凝集不全 在没有促凝剂和抗凝剂存在的情况下,正常血液采集后 1/2~2 h 开始凝固,18~24 h 完全凝固。临床检验工作中,有时为了争取时间快速检测,常在血液还 未开始凝固时即强行离心分离血清,此时的血清中仍残留部分纤维蛋白原,在 ELISA 测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块,易造成假阳性结果;这类情况 于次日复查时因血凝已完全,血清中不再有纤维蛋白原存在,故复查结果变为阴性。为避免上述干扰作用,解决的办法最hao是血液标本采集后必须使其充分凝固后再 分离血清,或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂。

(5)标本管中添加物质的影响 抗凝剂(如肝素,EDTA)、酶抑制剂(如 NaN3 可抑制 ELISA 系统中辣根过氧化物酶活性)及快速分离血清的分离胶等均对 ELISA 测定有一定干扰作 用。 综上所述,对临床检验 ELISA 测定中出现的假阳性或假阴性结果,在考虑试剂因素和操作因素之外,更多的应从标本因素方面进行分析,并应采取相应措施排除 干扰作用,从而为临床提供正确可靠的检测结果。

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