关于真菌的培养技术

玻片培养又称小培养，小培养法可以随时观察真菌的生长形态（如大分生孢子、小分生孢子及孢子柄等），还可以随时观察其生长发育的全部情况，有利于菌种的鉴定。

1、钢环法

（1）材料：白假丝酵母菌、沙保弱培养基、无菌玻片、盖玻片、钢环（带有缺 口）、石蜡。

（2）方法

①用无菌镊子取无菌小培养钢环，环的两面分别蘸取熔化的固体石蜡，平置于无菌载玻片上，另取一无菌盖玻片，在酒精灯火焰上加热后覆盖于钢环上，待冷后，小培养钢圈即被固定于载玻片与盖玻片之间。

②用毛细滴管吸取融化的培养基，从钢环上端孔注入，注入量占容积的1/2即可。

③培养基冷却凝固后，用接种针挑取材料，由上端孔接种于环内培养基上。

④置湿盒内，室温或37℃下培养2—3d后，逐日观察，镜下可连续看到真菌生长过程及菌丝、孢子等特征，一般7d左右即可长好。

⑤也可不用小培养钢环，直接将融化的培养基滴于无菌玻片上，待冷凝后从周边接种材料，用盖玻片覆盖后培养，在显微镜下连续观察生长情况。

（3）结果：镜下观察可见到有胞壁增厚的厚膜孢子及假菌丝。

2、小块琼脂玻片培养法
   用无菌操作法将制好的待用琼脂平板用无菌接种针或接种环切成大约1cm2的方块，将其放置于灭菌的载玻片上。将标本或待检菌接种于琼脂块四周边缘靠上方部位，然后用无菌镊子取一无菌的盖玻片盖在琼脂上。在无菌平皿内放入少量无菌水和一个无菌U形（或V形）玻璃棒。将此载玻片置于玻璃棒上，盖上平皿盖培养。每日用肉眼和显微镜观察孢子和菌丝的特点。