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磷脂酶D(PLD)测试盒

简要描述:

磷脂酶D(PLD)测试盒即磷脂酰dan碱水解酶,是催化磷酸二酯键水解和碱基交换反应的一类酶的总称,广泛存在于高等动植物和细菌等多种生物体中,具有参与细胞脂质代谢、信号传导、生物膜形成的抗逆境胁等生理功能。

更新时间:2024-04-10;厂商性质:经销商;览量:709

商品详情:
磷脂酶D(PLD)测试盒测定意义

磷脂酶D(EC3.1.4.4)即磷脂酰dan碱水解酶,是催化磷酸二酯键水解和碱基交换反应的一类酶的总称,广泛存在于高等动植物和细菌等多种生物体中,具有参与细胞脂质代谢、信号传导、生物膜形成的抗逆境胁等生理功能。

货号

规格

检测方法

YSH3357

100管/96样

微量法

YSH3357-1

50管/48样

可见分光光度法

测定原理

磷脂酶D催化水解磷脂酰dan碱末端的磷脂酰二酯键生成磷脂酸和dan碱,dan碱在dan碱氧化酶催化作用下生成甜菜碱和过氧化氢,过氧化氢在过氧化氢酶的作用下将4-氨基安替林和重蒸酚氧化成粉红色物质,在500nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、研钵、超速冷冻离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、恒温水浴锅,无水乙醇。
样品中AA提取:

1.按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行室温匀浆,然后转移到1.5 mL EP 管中,盖紧后(防止水分散失)置于沸水浴提取15 min;自来水冷却后,8000g,,4℃离心10min,上清液置冰上待测。

2.细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

3.血清等液体:直接检测。

计算公式如下:

1、血清(浆)LAP活力的计算:

单位的定义:每mL血清(浆)每分钟生成1 nmol的对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。

LAP(nmol/min/mL)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=205.8×ΔA

2、组织、细菌或细胞中LAP活力的计算:

1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。

LAP(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr

2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟生成1 nmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。

LAP(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W× V样÷V样总) ÷T=205.8×ΔA÷W

3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。

LAP(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(2000×V样÷V样总) ÷T=0.103×ΔA

V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:对硝基苯胺摩尔消光系数,9.72×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.05 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,2 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;2000:细菌或细胞总数,2000万。

注意事项:

1. 试剂盒中试剂三、试剂四和标准品均需临用前配制,且避光保存,配制好未使用完的4℃保存且3天内使用完毕。

2. 为保证实验结果的准确性,需先取1-2个样做预实验,如果测定的吸光值过高(高于2.5),用蒸馏水稀释后再测定。

3. 与茚三酮反应在570nm处无吸收峰,因此,570nm处测定结果不含这两种氨基酸的量。

4.检出限为100μmol/L。

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