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NAD苹果酸脱氢酶(NADMDH)测试盒

简要描述:

NAD苹果酸脱氢酶(NADMDH)测试盒广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物, 连接多条重要的代谢途径。

更新时间:2023-08-26;厂商性质:经销商;览量:682

NAD苹果酸脱氢酶(NADMDH)测试盒

商品详情:
测定意义:

MDH (EC 1.1.1.37)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物, 连接多条重要的代谢途径。因此,MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性,MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH,细菌中通常只含有NAD-MDH,在真核细胞中,NAD-MDH分布☣杈☣

货号

规格

检测方法

YSH3232

100管/96样

微量法

YSH3232-1

50管/48样

紫外分光光度法

测定原理:

NAD-MDH催化NADH还原草酰乙酸生成苹果酸,导致340nm处光吸收下降。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。
样品中AA提取:

1.按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行室温匀浆,然后转移到1.5 mL EP 管中,盖紧后(防止水分散失)置于沸水浴提取15 min;自来水冷却后,8000g,,4℃离心10min,上清液置冰上待测。

2.细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

3.血清等液体:直接检测。

计算公式如下:

1、血清(浆)LAP活力的计算:

单位的定义:每mL血清(浆)每分钟生成1 nmol的对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。

LAP(nmol/min/mL)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=205.8×ΔA

2、组织、细菌或细胞中LAP活力的计算:

1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。

LAP(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr

2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟生成1 nmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。

LAP(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W× V样÷V样总) ÷T=205.8×ΔA÷W

3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。

LAP(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(2000×V样÷V样总) ÷T=0.103×ΔA

V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:对硝基苯胺摩尔消光系数,9.72×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.05 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,2 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;2000:细菌或细胞总数,2000万。

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土壤β木糖苷酶(S-β-XYS)测试盒/微量法100T/48S
注意事项:

1. 试剂盒中试剂三、试剂四和标准品均需临用前配制,且避光保存,配制好未使用完的4℃保存且3天内使用完毕。

2. 为保证实验结果的准确性,需先取1-2个样做预实验,如果测定的吸光值过高(高于2.5),用蒸馏水稀释后再测定。

3. 与茚三酮反应在570nm处无吸收峰,因此,570nm处测定结果不含这两种氨基酸的量。

4.检出限为100μmol/L。


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